玉竹水提工艺研究-药学论文

本论文为玉竹水提工艺研究，可供药学及中药学相关专业参考，主要学习研究方法和论文框架。

1 仪器与试药

2 方法与结果

2.1 玉竹多糖的含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取无水葡萄糖对照品3.00mg,置50mL的容量瓶中,加水定容,制成0.600mg/mL的对照品溶液,即得。

2.1.2 4%苯酚溶液的制备

精密量取蒸馏后的苯酚溶液4g,至100mL棕色容量瓶中,加蒸馏水至100g,摇匀。4℃冷藏,备用。

2.1.3 供试品溶液的制备

取玉竹粗粉约1g,精密称定,置烧瓶中,加100mL水,回流提取1h,滤过,如上重复提取1次,合并两次滤液,浓缩,置100mL容量瓶中,定容。精密量取1.5mL,置具塞离心管中,加乙醇10mL,振摇,冷藏一夜后离心,取沉淀加水溶解,置100mL容量瓶中,定容。精密量取2mL,置具塞试管中,加4%苯酚溶液lmL,混匀,迅速加人硫酸7.0mL,摇匀,于40°C水浴中保温30min后,置冰水浴中5min,取出,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(通则0401),在490nm的波长处测定吸光度,计算葡萄糖的浓度(ug/mL),即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 线性关系考察

精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL,分别置于50mL容量瓶中,加水定容。精密量取上述各溶液2mL,照“2.1.3”项下的方法,自“加4%苯酚溶液lmL”起,依法测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。经计算得线性回归方程为：A=0.0109C+0.0111(r=0.9995,n=6)无水葡萄糖在12.14-42.14ug/mL范围内具有良好的线性关系,结果见表1-1和图1-1。

图1-1无水葡萄糖标准曲线

2.2.2 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液2mL,置具塞试管中,按“2.1.3”项下显色处理后,测定吸光度,平行测定6次,计算RSD值,结果见表1-2。

结果表明:无水葡萄糖的吸光度的RSD为1.00%,表明仪器精密度良好。

2.2.3 稳定性试验

精密吸取“2.1.3”项下供试品溶液2mL,置具塞试管中,按“2.1.3”项下处理后,分别在处理后的10、20、30、40、50、60、70、80、90min进行测定,记录吸光度,计算RSD值,结果见表表1-3。

由表1-3可以看出,在90min内玉竹多糖的RSD值为0.98%,表明供试品溶液在90min内稳定性良好。

2.2.4 重复性试验

取玉竹粗粉,按照“2.1.3”项下供试品溶液制备方法平行制备6份,处理并测定吸光度,并计算玉竹多糖的RSD,结果见表1-4。

结果表明:该批玉竹中玉竹多糖的RSD为1.17%,表明该方法重复性良好。

2.2.5 加样回收率试验

取1g玉竹粗粉,按“2.1.3”项下平行处理6份,精密量取浓度为24.08ug/mL的葡萄糖对照品溶液2.0mL,6份,并挥干,分别加入上述溶液中,每份2.0mL,精密量取,混合均勾。按“2.1.3”项下处理并测定吸光度,计算含量、回收率及RSD值,结果见表1-5。

结果表明:玉竹多糖的平均回收率为98.31%,RSD为2.15%,表明该方法加样回收率符合要求。

结论:综合以上实验结果,该方法线性、精密度、稳定性、重复性、加样回收率等均符合要求,说明该含量测定方法稳定可行。

2.3 干浸膏得率的测定

精密量取浓缩液100mL,置己干燥到恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,减压干燥至恒重,取出,室温下置干燥器中冷却30min,精密称定重量,计算干浸膏得率。

2.4 药材浸泡时间与吸溶媒率

称取玉竹粗粉30g,称6份,置具塞锥形瓶中,各加10倍量水没过药材,分别浸15min,30min,45min,60min,75min,90min后用纱布滤过药材,测量水的体积,计算各时间点药材的吸溶媒率,结果见表1-6和图1-2。

结果表明,玉竹在浸泡Emin以后的吸水量几乎没有变化,说明玉竹吸水已经达到饱和,此时的吸水率为100%,因此确定玉竹药材浸泡时间为Emin。另外在进行正交试验时,第一次提取需多加药材重量1倍的水,第二次、第三次加正常倍量水。

2.5 正交试验设计

将玉竹加水提取的工艺路线,通过正交表进行试验设计,以玉竹多糖含量和干膏得率为水提评价指标,加水倍量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为影响因素进行优化,因素水平表见表1-7。

2.5.1 正交试验结果及方差分析结果

称取玉竹粗粉9份,每份30g,按正交表的条件加水浸泡1h,回流提取,滤过,合并滤液,减压浓缩至1000mL,备用。按“2.3”项下方法计算干膏得率。分别精密吸取0.5mL提取液于具塞试管中,按“2.1.3”项下方法测定玉竹多糖含量。结果见表1-8,方差分析见表1-9、表1-10和表1-11。

以玉竹多糖含量为指标,通过表1-8对试验结果的极差分析可以看出各因素作用主次顺序依次为提取次数、提取时间、加水倍量,即C>B>A。方差分析表1-9显示C因素差异显著(P<0.05),A、B因素无显著性差异(P>0.10))。由表1-8直观分析,A因素中A3>A1>A2,故选择A3;B因素中B3>B1>B2,故选B3;C因素中,C3>C2>C1,故选C3,由此可推出,以玉竹多糖含量为指标,最佳提取工艺为A2B3C3。

由表1-11可知,以玉竹多糖含量和干浸膏得率两个不同的指标考察提取工艺,所得的最优条件相同,即玉竹水提的提取工艺为A2B3C3,即加入D倍量的水,提取F次,每次G小时。

2.5.2 验证实验

为了进一步验证提取工艺的稳定性与可靠性,按照最优工艺提取三批药材,以玉竹多糖含量和干膏得率为指标进行验证。结果见表1-12。

结果见表1-12,按最佳工艺进行提取,玉竹多糖含量和干膏率均处于较高水平,表明该工艺合理,稳定可行。

3 小结与讨论

综合以上研宄结果,确定玉竹最佳水提工艺的条件为:玉竹药材加D倍量的水回流提取F次,每次提取G小时(注:第一次提取多加1倍量的水浸泡Emin),合并滤液,减压浓缩成浸膏(相对密度1.05-1.10),置真空干燥箱中干燥(80°C,-0.08MPa)得干浸膏。

研究发现蒽酮-硫酸法测多糖,操作比较麻烦;苯酚-硫酸法操作简单,显色稳定,灵敏度高,重现性好,所以本实验采用苯酚-硫酸法测定玉竹多糖的含量。经查阅文献,发现玉竹多糖的提取方式有以下几种:温浸提取、超声提取、回流提取。因考虑到市场需求,及操作的可行性,本试验采用回流提取。考察加水倍量、提取时间、提取次数对多糖提取率的影响。

实验中对玉竹药材浸泡时间与吸水率进行了考察。从玉竹吸水率曲线中发现玉竹在浸泡Emin以后的吸水量几乎无变化,说明此时吸水已经达到饱和,此时的吸水率为100%,因此确定其浸泡时间为Emin。在进行正交试验时,第一次多加玉竹重量1倍的水,第二次、第三次加正常倍量水。

本实验中也存在一些不足的地方。多糖的提取一般采用水煎煮、回流提取,乙醇沉淀的方法来提取纯化其中的多糖。所以水提醇沉法纯化多糖,或者用大孔树脂对其活性成分进行富集,可以降低干膏得率,减少服药量,便于制剂,但本试验未对多糖提取工艺进行纯化。