药学毕业论文精品范文《新疆地产侧柏叶中总黄酮含量测定方法研究》

新疆地产侧柏叶中总黄酮含量测定方法研究

摘要 目的：建立新疆地产侧柏叶中总黄酮含量的测定方法。方法：用比色法，检测波长425nm，以芦丁作对照品，测定侧柏叶中总黄酮含量。结果：灵敏度以芦丁摩尔吸收系数表示ε=1.5×103，芦丁浓度在3.5-21（ug/ml）之间与吸收度呈良好的线性关系，回归方程A=0.0268C+0.0043，R=0.9994。平均回收率101.1%，RSD=2.19%。结论：该方法灵敏，简便，重现性好，为地产侧柏叶的开发利用提供质量控制方法。

关键词：新疆；侧柏叶；黄酮；比色法

侧柏叶为柏科植物侧柏Platycladus  orientalis ( L .)Franco . 的干燥枝梢与叶，为常用中药，具有凉血止血、镇咳祛痰、生发乌发之功效。据文献记载，侧柏在我国境内向西分布至陕西、甘肃，除新疆、青海，几遍全国[1] 。经调查考证，新疆裁培侧柏多年[2] ，有关其化学成分的研究少有报道。其主要有效成分有挥发油、黄酮和鞣质等，据报道其中镇咳祛痰的主要成分为黄酮类成分，主要有槲皮素、芦丁、杨梅树皮素、扁柏双黄酮、穗花杉双黄酮等[3]，以上黄酮类成分均可与铝离子生成络合物而显色。因此，我们用比色法对地产侧柏叶中总黄酮含量进行了测定，为地产药材的开发利用提供质量控制方法。

1   仪器与材料

1.1  仪器  

UV-2401紫外分光光谱仪（日本岛津）、S53型紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）、TP-300型超声波清洗器（北京天鹏新技术公司）、BS110型电子天平（德国赛多利斯）、索式提取器、干燥器等。

1.2  样品与试剂  

侧柏叶药材采自新疆石河子市，经XX副教授鉴定为侧柏Platycladus  orientalis (L.)  Franco.；芦丁对照品（上海试剂二厂）、三氯化铝、石油醚（30-60℃）、甲醇、无水乙醇等均为分析纯。

2  方法与结果

2.1  对照品溶液的制备  

取芦丁对照品，加甲醇制成70ug/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.2  供试品溶液的制备  

取干燥侧柏叶样品粉碎，过40目筛。取样品粗粉约1g，精密称定，滤纸包裹后置与索氏提取器中，加石油醚（30-60℃）60ml，加热回流至滤纸包无色，弃去石油醚 [4]；取出滤纸包，挥干石油醚，样品置于三角烧瓶中，加甲醇溶液100ml左右，用超声提取器提取[5]；抽滤溶液，过滤溶液；然后定容到200ml，摇匀，作供试品溶液。

2.3  工作波长选择  

分别吸取芦丁对照品溶液和供试品溶液各2ml，置10ml量瓶中，加甲醇溶液至刻度，分别为未显色溶液；再吸取芦丁对照品溶液和供试品溶液各2ml，置10ml量瓶中，各加1.0ml 5%三氯化铝甲醇溶液，显色5min，加甲醇至刻度，二者为显色溶液。用甲醇作空白，对以上4种溶液于200-800nm波长处进行扫描[6]，结果见图1-4。

结果表明，显色溶液在425nm处有明显的吸收，因此选择425nm为工作波长。

2.4  线性考察  

分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml置于10ml量瓶中，定容，按2.3项下操作，用溶剂加显色剂作对照，在425nm波长处测定吸收度，回归方程A=0.0268C+0.0043，R=0.9994。芦丁对照品溶液浓度在3.5-21ug/ml范围内，线性关系良好。结果见图5。

2.5  灵敏度试验  

吸取对照品溶液2ml，两份，分别置于10ml量瓶中，显色，在425nm处测定吸收度，以摩尔吸收系数（ε）表示灵敏度，按下式计算：ε=A·l/C（A为吸收度，l为溶液厚度，C为对照品溶液摩尔浓度），结果ε＝1.5×10 3，表明上述条件对芦丁的测定具有高灵敏度。

2.6  显色稳定性试验  

吸取供试品2ml ，5份，置于10ml量瓶中，分别加入1.0ml 5%三氯化铝甲醇溶液，显色5min，加甲醇至刻度，每隔5min测定吸收度，吸收度无明显变化，结果见表1。

2.7  精密度试验  

取7月份供试品2ml，5份，分别置于10ml量瓶中，显色，在425nm处测定吸收度，连续测定5次，结果见表2。

2.8  正交试验  

以7月份采收样品为供试品，在此试验方法中有甲醇浓度、超声时间、超声功率（最大功率300W）等因素影响试验结果，所以，设计3因素3水平进行正交试验，结果见表3。

2.9  方差分析  结果见表4。

根据直观分析及方差分析可知，三个因素中只有甲醇浓度对吸收度影响显著，而其他两个因素则可以在三水平中选择更节能、更节省时间的水平，由于在35%的功率处超声不连续，所以测样品含量时因该采用A3B1C2的方案，即70%甲醇，超声时间20min，超声功率60%。

2.10  重现性试验  

取7月份样品5份，按2.9项确定方法提取、定容、显色，在425nm处测定吸收度，连续测定5次，结果见表5。

2.11  样品含量测定  

按已确定提取方法，分别提取样品，制成供试品液，按2.10项下操作，测定不同采收期侧柏叶中总黄酮含量。结果见表7。

从测定结果可以看出地产不同采收期侧柏叶中总黄酮含量变化不显著。

3  小结与讨论  

经试验考察，提取溶剂甲醇浓度（70%）高于文献报道（50%），且提取时发现低浓度甲醇提取液出现溶液轻微浑浊，考虑主要原因为部分鞣质被溶出，较高甲醇浓度则可排除鞣质干扰。采用超声提取较传统方法优点在于省时、快速、简单、节约能源。测定结果表明新疆地产侧柏叶中总黄酮平均含量略高于内地（1.35%）。

参 考 文 献

[1] 郑俊华主编．生药学．1999：247．

[2] 新疆生物土壤沙漠研究所．新疆中草药．1975：205．

[3] 郑虎占，等主编．中药现代研究与应用．1998：2896．

[4] 张国琴，等．侧柏叶中总黄酮成分含量测定．西北药学杂志，2001，16（3）：107-108．

[5] 赵永光，等．超声波法提取侧柏叶片中黄酮类化合物的研究．河北农业大学学报，2005，28（2）：54-56．

[6] 程立方，等．侧柏叶总黄酮提取工艺与含量测定方法研究．时珍国药研究，l995，6(4)：l5-l7．王康，等．

致 谢

在完成本课题实验过程中得到XXX老师的大力支持和帮助，在此表示衷心的感谢！

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